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人工合成:已知目的基因序列,用dna合成仪直接合成。
2.
构建基因表达载体
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用相同限制酶切割目的基因和载体,如质粒,使其产生相同黏性末端。
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用dna连接酶将目的基因与载体连接,形成重组dna分子。
3.
导入受体细胞
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植物细胞:常用农杆菌转化法,利用农杆菌ti质粒将目的基因整合到植物染色体。
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动物细胞:常用显微注射法,借助显微操作仪将重组dna注入受精卵。
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微生物细胞:用ca2?处理细胞成感受态,使其吸收重组dna。
4.
目的基因的检测与鉴定
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分子水平检测:dna分子杂交看目的基因是否插入;核酸分子杂交检测转录;抗原
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抗体杂交检测翻译。
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个体生物学水平鉴定:对转基因生物做抗虫、抗病接种实验,观察性状。污染物。
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